3. собственные исследования3.1 Изучение биологической активности вновь синтезированных соединений Были проведены скрининговые исследования по изучению противомикробной активности 270 вновь синтезированных соединений, принадлежащих к разным химическим группам, по отношению к тест-культурам - St. aureus (spp), Е. coli (K-88) и Candida albicans. По результатам исследования было выявлено, что 74 соединений проявляют активность по отношению к St. aureus, что составляет 24,9\%. Не оказывали существенного влияния на данный микроорганизм 223 изученных соединений (75,1\%). По отношению к грамотрицательным микроорганизмам, в частности, к кишечной палочке эти показатели составляют: 54 (18,2\%) и 243 (80,4\%), соответственно (таблица 1). Таблица 1 – Результаты первичного скрининга антимикробных соединений (n=297) Производные Активность в отношении : Escherichia coli. K-88 Staphylococcus aureus Candida albicans Оксиранов (134) 21 30 8 Пиридинов (98) 8 15 3 Изатина (27) 1 8 0 ЧАС (38) 24 21 15 Всего (297) 54 74 26 Низкую противомикробную активность (МПК 125-1000 мкг/мл) по отношению к изучаемым штаммам показали 85,6\% к Staphylococcus aureus и соединений 91,5\% к Escherichia coli. Наименьшую активность показали соединения изатина. По результатам скрининговых исследований выявлено 74 соединения проявивших высокую ПМА по отношению к Staphylococcus aureus и 54 к Escherichia coli. В отношении Staphylococcus aureus производные изатина проявляют ПМА в диапазоне 0,6-4,8 мкг/мл. При этом высокую активность к St. aureus имеют 3 соединения. Наиболее активное соединение обладает МПК=0,3 мкг/мл и проявляет высокую активность к стафилококку: МПК по отношению к St. aureus составляет 25-62 мкг/мл. В группе производных оксиранов получены следующие результаты: активность к Escherichia coli проявили 6 соединений, МПК которых находится в диапазоне 53-98 мкг/мл, что свидетельствует об умеренной активности. Так же высокую активность показали соединения четвертичных солей аммония (ЧАС), соединения этой группы проявляли активность в отношении широкого спектра возбудителей, в том числе резистентных к антимикробным препаратам, и были отобраны для дальнейших исследований по разработки нового препарата. Среди веществ, проявивших наиболее высокую активность, 7 соединений были исследованы по активности к 10 тест - культурам для определения биологической активности к штаммам: Сitrobacter frendii, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes. Соединения, проявляющие противомикробную активность в отношении данных штаммов, имеют перспективность к дальнейшим исследованиям. При анализе противомикробной активности по отношению к отдельным штаммам получены следующие данные (табл. 2). Наибольшую активность в отношении кокковой микрофлоры проявляют соединения пиридинов, в отношении же бактерий кишечной группы и патогенных грибов большую активность показали производные оксиранов. При анализе противомикробной активности по отношению к отдельным штаммам получены следующие данные (табл. 2). Наибольшую активность в отношении кокковой микрофлоры проявляют соединения 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-метилфенил)-2-цианооксиран-2-л]метилен}малононитрил, в отношении же бактерий кишечной группы (грамм -) 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен}малононитрил. Наибольшую активность в отношении всех изучаемым штаммов микроорганизмов показало соединение 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил. Максимальная активность соединения проявилась в отношении Candida albicans (МПК составляет 19 мкг/мл). Соединение 2-амино-6-(3-
Виды бактерий
Исследуемые соединения
№ Синтезированные соединения Минимальная подавляющая концентрация МПК, мкг/мл Производные оксиранов №1 2-амино-6-(3-бромфенил)-4-(дицианометилен)-3- азабицикло[3,1,0]гекс-2-ен-1,5дикарбо-нитрил* 250 44 16 230 230 172 250 250 21 31
№2 2-[амино(3-фенил-2-цианооксиран-2-ил)метилен ]малононитрил* 98 115 44 98 98 24 115 98 44 61 №3 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил ]метилен}малононитрил* 98 109 32 44 60 26 98 62 31 44 №4 2-{амино[3-(4-метилфенил)-2-цианооксиран-2-ил ]метилен}малононитрил* 51 53 37 62 62 98 116 96 61 62 Производные пиридинов №5 2-Хлор-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарб онитрил* 44 59 41 44 66 39 36 62 62 66 №6 2-Бром-5,6,7,8- тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил* 55 62 44 51 62 29 44 58 33 58 №7 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбон итрил * 29 24 53 32 24 26 28 31 19 24 контроль Фуразолидон 62 83 29 66 68 61 250 66 32 44
Таблица 3. Активность соединений ЧАС в отношении широкого спектра микроорганизмов
Виды бактерий
Исследуемые соединения
№ Синтезированные соединения Минимальная подавляющая концентрация МПК, мкг/мл Алкилбензилдиметиламмоний хлориды
Контроль (для ЧАС) Бромоцид 625 277 350 625 625 625 625 416 625 625
* - соединения проявляющие активность более чем 1000 мгк/мл далее не исследовались
бромфенил)-4-(дицианометилен)-3-азабицикло[3,1,0]гекс-2-ен-1,5дикарбо-нитрил угнетает рост Candida albicans в 21 мкг/мл. При этом соединение 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил проявляет максимальное бактериостатическое действие в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов: St. aureus, Е. coli, St. epidermidis, Ps. aeruginosa с МПК 30 мкг/мл. Соединение 2-амино-6-(3-бромфенил)-4-(дицианометилен)-3-азабицикло[3,1,0]гекс-2-ен-1,5дик арбо-нитрил угнетает рост штаммов грибов рода кандида и трихофитон в концентрации 31 мкг/мл, так же оказывает выраженную активность в отношении грамм положительной микрофлоры. Соединения ЧАС выбранные для исследования в отношении широкого спектра микроорганизмов исследовались на тех же культурах. Что и вновьсинтезированные соединения. Результаты исследования представлены в таблице 3. Как видно из таблицы 3 наиболее эффективными являются соединения алкилбензилдиметиламмоний хлорид (катапав С80) и дидецилдиметиламмоний хлорид (сетопав С70). Высокоэффективными противомикробными средствами на основе ЧАС являются соединения с МПК менее 125мкг/мл. Активность данных соединений обусловлена углеродными показателями соединений, так как установлено, что наибольшую активность проявляют ЧАС с углеродным показателем С12-16. Введение в состав соединений галогенового радикала приводило к существенному изменению свойств соединений, как химических, так и бактерицидных. Так введение брома (Br) приводило к уменьшению биологической активности соединений, в отношении бактериальных и грибковых патогенов Введение же йодного (J) радикала увеличивает бактерицидную и фунгицидную активность соединений, при этом работа с соединениями осложняется низкой стабильностью соединений, а так же высокой окислительной способностью галогена. Остальные соединения, отобранные для углублённого исследования, проявили среднее бактериостатическое действие по отношению к грибам и спорообразующим бактериям.
3.1 Противомикробная активность синтетических соединений 1. Производные оксиранов – содержат напряжённый трёхчленный цикл и карбонильную группу, что создаёт предпосылки к каскадным процессам циклизации, приводящим к образованию гетероциклических соединений сложного функционального окружения. Наибольшую активность среди скрининговых соединений оксиранов показали 2-амино-6-фенил-4-(дицианометилен)-3-азабицикло[3.1.0]гекс-2-ен-1,5-дикарбонит рил и 2-{амино[3-(4метилфенил-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил. Производные данных соединений имеющие в молекуле – малонитрил оказывают существенно большую активность по отношению к бактериям кишечной группы, при этом активность в отношении кокковой микрофлоры и грибов остаются на достаточно низком уровне. Соединение 2-амино-6-фенил-4-(дицианометилен)-3-азабицикло-[3.1.0]-гекс-2-ен-1,5-дикарбони трил оказывает выраженную фунгицидную активность, а так же высокую МПК по отношению к кокковой микрофлоре. При этом для дальнейших исследований было выбрано соединение 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил так как это соединение проявляем активность к наибольшему числу возбудителей. 2. Производные пиридинов – гетероциклические соединения, содержащие в своём составе никотиновую кислоту или её амид, что обуславливает широкую биологическую активность. Наибольшую активность среди изученных производных пиридинов проявили 2-галоген-5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3,4-дикарбонитрилы. Активность соединений существенно изменяется в зависимости от галогена входящего в состав молекулы, что подтверждается данными лабораторных исследований. Производные данного соединения показали результаты показавшие их перспективность для дальнейших исследований. Особый интерес представляет 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил, имеющий в составе йодный радикал, что позволяет предположить высокую активность и низкую скорость развития резистентность у патогенов. 3. Производные изатина – показали высокую активность в отношении грамм положительной микрофлоры, однако, их активность в отношении бактерий кишечной группы была незначительной. Наибольшую активность среди производных изатина проявил 1-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)-1Н-индол-2,3дион, МПК которого составил 24мкг/мл для St. aureus. 4. Соединения ЧАС показали достаточно высокую активность в отношении широкого спектра микроорганизмов. При этом соединения с МПК≥125мкг/мл считали перспективными. К основным элементам структуры, которые обуславливают противомикробные свойства ЧАС, относятся гидрофильные полярные четвертичные аммониевые группы и гидрофобные углеводородные радикалы. ПМА в гомологических рядах моно- и бис- четвертичных аммониевых солей зависит от типа заместителей у атома азота, длины углеродной цепи радикала, степени его насыщенности и разветвленности, наличия гидроксильных, эфирных групп и т.п. Соединения, содержащие короткоцепочечные углеводородные радикалы (С<8) у атома четвертичного азота, лишены или проявляют умеренные противомикробные свойства. Увеличение количества атомов углерода в радикале приводит к появлению поверхностной активности и вместе с ней противомикробных свойств. Активность повышается при введении в структуру ЧАС ненасыщенных углеводородных радикалов, ассиметричного атома азота, простых эфирных связей. Как видно из таблицы 3, наибольшую активность показали: алкилбензилдиметиламмоний хлорид (С12-14) и децилдиметиламмоний хлорид обладающие поверхностно активным действием, за счет достаточно длинной углеродной цепи. Механизм их антимикробного действия связан с нарушением проницаемости мембран клеток, позволяя проникать в них низкомолекулярным соединениям, а также наличием в составе молекулы заряженного пятивалентного азота. Таким образом, на основании углублённых и доклинических исследований соединений 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен}малононитрил выявлено, что соединения проявляют высокую противомикробную активность по отношению к штаммам грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, выделенных от больных животных (в том числе полирезистентным штаммам): Ps. aeruginosa, Kl. pneumonia, St. aureus, St. epidermidis, Sal. haemolyticus, E. faecalis, Str. pneumonia, S. pyogenes и С. albicans. При изучении противостафилококковой активности соединений установлены минимальные бактериостатические и бактерицидные концентрации, равные 1,5-6,2 мкг/мл. Установлена зависимость активности соединений в группе 2-галоген-5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3,4-дикарбонитрилов установлена зависимость биологической активности от галогенового радикала. Достоверно установлена наибольшая активность йод содержащих соединений. Для увеличения эффективности, а также времени возникновения резистентности было решено использовать сочетание алкилбензилдиметиламмоний хлорида и децилдиметиламмоний хлорида показавших высокую эффективность в ходе скрининговых исследований.
3.2 Токсические свойства соединений. Для проведения опыта использовали крысятях с живой массой 99,6 –110,8г, отобранных по методу аналогов. Животным внутрижелудочно вводили определённую дозу препарата: 550, 800, 1200, 1600, 2000, 2500, 3000, 4000, 5000 и 6000 мг/кг, после чего за ними велось постоянное клиническое наблюдение в течение 24 часов. прекращалось. Выбранные дозы препарата вводились крысятам внутрь в виде водного раствора при температуре 37ºС, после чего они помещались в клетки. Через два часа после введения препарата животным предоставляли свободный доступ к воде и пище. В процессе проведения опыта было установлено, что после введения соединений животным в дозах 4000, 5000, 6000 мг/кг, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15 – 30 минут, которое затем переходило в угнетение. Через три часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя пять часов с момента введения 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрила у животных, которым ввели соединение, в дозе 6000 мг/кг наблюдали клонические судороги и непроизвольное мочеиспускание. Животные не отвечали на внешние раздражители и, через несколько минут, констатировали гибель. Исходя из факта гибели опытных животных, не перенёсших дозу 6000 мг/кг живой массы, и оставшихся в живых животных с введённой дозой – 3000мг/кг живой массы, по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами 4500мг/кг. В процессе проведения опыта было установлено, что после введения препарата животным в дозах 3000, 4000, 5000 мг/кг, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15 – 30 минут, которое затем переходило в угнетение. Через три часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя пять часов с момента введения 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен}малононитрил у животных которым ввели 5000мг/кг наблюдали клонические судороги, непроизвольное мочеиспускание. Животное не отвечало на внешние раздражители и через несколько минут погибало. Исходя из факта гибели животных, не перенесших дозу 5000 мг/кг живой массы, и оставшегося в живых животного получившего дозу – 2500мг/кг живой массы, по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами 3750мг/кг. После предварительного нахождения LD50, у 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрила доза составила 4500 мг/кг живой массы, а у 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил 3750 мг/кг, дозы были введены двум группам животных по 10 крыс в каждой, подобранных по принципу пар-аналогов по полу и живой массе. С соблюдением всех условий, как в опыте по предварительному нахождению смертельной дозы. По результатам опыта установлена гибель 50\% животных. Доза 3000 мг/кг живой массы тела, не вызвавшая гибель животных, является максимально переносимой дозой препарата при его однократном пероральном введении для 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрила (LD0). Доза введении (LD50). Доза 5000 мг/кг массы тела является - абсолютно смертельной (LD100). Следовательно, вещество 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил по классификации химических веществ, при однократном оральном пути введения относится к III классу токсичности – умеренно токсические вещества. Данный опыт был также проведён по отношению 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрила. Исследование острой токсичности данных соединений на мышах показало их принадлежность к классу низко токсичных соединений (3-й класс опасности). Величина ЛД50 соединений 2-Йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил равна 4500,0 и 3750,0 мг/кг т.е. они в 14,5-17,4 раза менее токсичны, чем эталонный препарат (натриевая соль мефенамовой кислота).
3 . 3 Биологическое действие препарата албиоцид. При концентрации препарата албиоцид то 2\% до 0,125\% включительно рост всех микроорганизмов отсутствовал. Данные изучения бактериальной активности препарата приведены в таблице 4. Таблица 4. Бактерицидное действие препарата албиоцид на E.coli и St.aureus Концентрация препарата, \% при экспозиции 30 мин. и
Тест-культура
расходе препарата 350мл/м2 3\% 1\% 0,5\% 0,05\% 0,005\% Результаты обезвреживания
Escherichia coli (K-88) - - - - +
Staphylococcus aureus (spp.) - - - - +
Приведённые в таблице 4 данные свидетельствуют, о высоком бактерицидном действии препарата. Из данных таблицы видно, что инактивация кишечной палочки (Escherichia coli) произошла при обработке тест-объектов рабочим раствором препарата албиоцид при концентрации 0,05\% экспозиции 30 мин. Инактивация золотистого стафилококка произошла при концентрации рабочего раствора препарата албиоцид 0,05\%, экспозиции 30 мин. Опыт проводился на тест-объектах без использования органической защиты тест-культур.
3.4 Ф армако - токсикологические свойства препарата албиоцид. определения параметров - LD16, LD50 и LD84. По результатам токсикологических исследований установлено, что ЛД50 препарата албиоцид составило – 4,6±1г/кг, что свидетельствует о его принадлежности к 3-ему классу умеренно токсичных соединений (ГОСТ 12.1.007-76).
Изучение аллергизирующего действия препарата албиоцид проводили путем воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста). Установлено, что албиоцид не вызывает феномен Артюса-Сахарова. У всех опытных животных после шестикратного введения препарата на месте инъекций не отмечалось характерных для геморрагического воспаления признаков (отеки, уплотнения). Сразу после инъецирования в местах укола образовывались небольшие инфильтраты, размером с маленькую горошину и отек, вызванные травматическим повреждением кожи, которые рассасывались в течение 3-24 часов. Субхроническая токсичность. Препарат задавали ежедневно в различных дозах от LD50 (4600 мг/кг) по схеме представленной в таблице 5. В IV период погибло 3,3 \% животных – одна крыса, на 16-е сутки. В V период погибло 20 \% животных – две крысы на 18-е сутки, три крысы на 19-е сутки, одна крыса на 20-е сутки. В VI период погибло 10 \% животных от общего числа крыс до начала опыта. Одна крыса погибла на 22-е сутки, две крысы на 24-е сутки. В VII период погибло 10 \% животных. Две крысы на 26-е сутки и одна крыса на 27-е сутки. Таблица 5. Субхроническая токсичность препарата албиоцид.
Номер периода I II III IV V VI VII Сутки от начала опыта 1-4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 25-28 Доли от LD50 0,1 0,15 0,22 0,34 0,5 0,75 1,12
Доза от LD50 200 300 440 680 1000 1500 2240
Гибель (\%) 0 0 0 3,3 20 10 10
Суммарная доза за период (на 1 кг массы тела) 800 1200 1760 2720 4000 6000 8960 Суммарная доза (на 1 кг массы тела) 800 2000 3760 6030 10030 16030 24990 LD50 при многократном скармливании препарата, суммарная доза препарата за I – V периоды опыта – 10480 мг/кг массы тела животного (800+1200+1760+2720+4000). Коэффициент кумуляции (Кк) при многократном применении препарата албиоцид рассчитываем по формуле Ю.С. Кагана и В.В. Станкевича (1964): К к = LD50 хроническая/ LD50 острая , Кк = 10480 : 4600 = 2,28.
Таблица 6. Влияние албиоцид на показатели крови крыс (М±m) Показатель I–период 1–4 сутки II–период 5–8 сутки III–период 9– 12 сутки
VI–период 13–16 сутки
V–период 17–20 сутки группы опыт 800 мг/кг контроль опыт 1200мг/кг контроль опыт 1760 мг/кг контроль опыт 2720мг/кг контроль опыт 4000мг/кг контроль
Эритроциты, 1012/л Лейкоциты, 109/л 7,61±0,23 7,69±0,33 7,5±0,33 7,8±0,33 6,94±0,15* 7,66±0,19 7,8±0,27 6,37±0,33 7,92±0,44 6,9±0,66
9,77±1,4 10,56±1,2 9,89±0,7 8,94±0,7 10,6±1,3 9,74±0,7 12,6±1,1 8,56±1,42 13,38±1,0 9,1±1,42 Гемоглобин, г/л 16,3±0,35 16,7±0,16 16,1±0,16 16,9±1,3 16,3±0,53 16,8±0,72 16,4±0,23 15,6±1,2 17,4±0,1 16,1±0,87
СОЭ, мм/ч 3,3±0,25 2,4±0,33 2,9±1,23 2,7±0,25 3,1±1,56 2,5±0,6 4,7±1,32 2,4±0,38 5,3±0,21 2,6±0,23 Лейкограмма: Палочкоядерные нейтрофилы, \% 2,2±0,56 3,0±0,16 2,5±0,27 2,55±0,24 2,1±0,48* 2,9±0,62 2,4±0,75 3,0±1,54 2,3±1,14 2,9±1,23 Сегментоядерные нейтрофилы, \% 31,6±4,09 20,3±3,64 24,1±2,69 31,75±1,72 22,1±3,04 26,6±3,2 20,3±1,4 26,3±0,23 18,4±0,42 26,1±3,4
Эозинофилы, \% 2,5±0,87 3,1±0,98 3,1±041* 4,35±0,53 3,8±1,29* 4,6±0,29 3,0±0,99 4,5±0,81 2,6±1,65 4,26±0,69 Базофилы, \% 0,1±0,1 0±0 0±0 0,05±0,05 0,1±0,1 0±0 0±0 0,1±0,1 0,1±0,1 0±0 Моноциты, \% 0,1±0,1 0,2±0,12 0±0 0,2±0,11 0,1±0,1 0±0 0,2±0,11 0,2±0,12 0±0 0,2±0,11 Лимфоциты, \% 63,7±4,96 74,2±4,57 70,7±2,91 60,95±1,64 72,3±3,49 65,8±3,71 74,5±1,2 65,4±0,2 77,5±3,84 67,4±1,54 * P<0,05
21 Влияние албиоцид на показатели крови крыс В ходе эксперимента по изучению субхронической токсичности препарата албиоцид были проведены гематологические исследования крови от шести животных из каждой группы. Результаты представлены в таблице 6. Из полученных данных определённый интерес представляет изменение количества лейкоцитов, СОЭ, а также изменения в лейкоцитарной формуле опытных животных. На 9–12 сутки от начала опыта при суммарной дозе препарата албиоцид 1760 мг/кг, происходило прогрессивное возрастание лейкоцитов на 7,8 \% по сравнению с начальным периодом (суммарная доза – 800 мг/кг), на 8,1 \% по сравнению с контролем и на 26,2 \% – на 17–20 сутки. Это говорит о нарастающей воспалительной реакции в организме. На 13–16 сутки повысилась скорость оседания эритроцитов на 29,8 \% по сравнению с началом опыта и на 49 \% – по сравнению с контролем. На 13–16 сутки повысилась скорость оседания эритроцитов на 29,8 \% по сравнению с началом опыта и на 49 \% – по сравнению с контролем. Высокие концентрации албиоцид (800–1760 мг/кг) влияют на эритропэз: происходит снижение количества эритроцитов (с 7,61 до 6,95 1012/л) в опытных группах на 9 \%, к концу опыта возросло количество клеток на 14 \% по отношению к контролю. Изменения в лейкоцитарной формуле также указывают на происходящие перемены в организме животных опытных групп. Количество лимфоцитов возрастало с увеличением суммарной дозы препарата с 63,7 до 77,5 \% и в дозе 4000 мг/кг уже превышало верхнюю границу нормы. На фоне лимфоцитоза происходило снижение количества сегментоядерных нейтрофилов с 31,6 до 18,4 \% , что ниже уровня нормы на 7 \%. У животных опытных групп выявляли моноцитопению и низкий процент эозинофилов. Раздражающее действие препарата албиоцид определяли методом конъюнктивальных проб. Реакцию учитывали дважды. После нанесения албиоцид спустя 5 минут наблюдали гиперемию слёзного протока и склеры в направлении к роговицы. Указанные изменения постепенно не исчезали через 2 – 5 часов, полное исчезновение в течение 48 часов, видимых признаков раздражения конъюнктивы и осложнений не отмечали. Таким образом, препарат албиоцид проявляет умеренное аллергизирующее и раздражающего действия
3.5 Клинические испытания препарата албиоцид. Используя «Методические указания о порядке испытания новых дезинфекционных, средств для ветеринарной практики», от 06.05.1987г. №739-768-М, и согласно «Правилам, проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» МСХ от 15.07.2002. и положительных результатов лабораторных испытаний были проведены производственные испытания эффективности препарата албиоцид. Дезинфекцию проводили препаратом албиоцид на Животноводческой ферме ЗАО «Воронцовское» Ейского района Краснодарского края. Из таблицы 7 видно, что общее количество микробных клеток не превышает 30000 тыс. микробных клеток, подсчитанных на пяти чашках Петри, на которые производились смывы-разведения 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000. Коли - титр равен 1,0 или более из этих результатов по Рекомендации по санитарно-бактериологическому исследованию смывов с поверхностей объектов подлежащих ветеринарному надзору, качество проведённой дезинфекции расценивается как удовлетворительное.
Таблица 7. Результаты бактериологических исследований после дезинфекции препаратом албиоцид на животноводческой ферме Объект Показатели
Escherichia coli Staphylococcus
Анаэробные бактерии
Общее число микробных клеток в 1 мл
Коли-титр.
Стены Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 30000 - микр/клеток
Кормушки Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 10000 - микр/клеток от 10000- Поилки Не выявлены Не выявлены Не выявлены 20000 - микр/клеток
Станок Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 10000 микр/клеток
ворота Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 30000 микр/клеток
Молоко-провод Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 10000 микр/клеток От 10000
Более 1,0
1,0
1,0 скребок Не выявлены Не выявлены Не выявлены -20000 микр/клеток 1,0 Расчёт себестоимости дезинфекции объектов ветеринарного надзора производили в сравнительном аспекте, по сравнению с используемыми, для этих целей дезинфектантами, при одинаковых затратах на проведение профилактической дезинфекции. При проведении дезинфекции использовали 1\%-ный рабочий раствор препарата албиоцид из расчета 350 мл/м2 обрабатываемой поверхности с использованием аэрозольного генератора ДУК - 2 на животноводческой ферме. За аналоги препарата албиоцид использовали препараты на основе четвертично аммониевого соединения мегадез, вироцид и дезолайн. Сравнительная себестоимость обработки 1000м2 препаратом албиоцид с указанными препаратами представлена в таблице 8. Таблица 8 Сравнительная стоимость препаратов и себестоимость обработки из расчёта на 100м2 Препарат Стоимость препарата (руб/литр) Расход препарата л/100м2 методом орошения Стоимость обработки на 1000м2 (руб) Концентрация рабочего раствора Вироцид 479 3,0 1437 1\% Дезолайн 203 4,0 812 1\% Мегадез 770 3,0 2310 1\% албиоцид 350 3,0 1050 1\%
Приведённые в таблице 8 данные показывают, что при всех прочих равных затратах на проведение дезинфекции из расчёта на 100 м2 поверхности, дезсредство албиоцид выгодно отличается от выше приведённых препаратов, так как цена обработки указанной площади составляет 1050 руб., что значительно ниже стоимости этой же обработки препаратами: вироцид - 1437 руб. и мегедез - 2310 руб. при качестве обработки не только не уступающем аналогам, но по ряду показателей даже превосходя их.
Стоит отметить возможность полного цикла производства данного препарата из отечественного сырья, так как все высокоэффективные аналоги дезинфицирующих средств на основе ЧАС производятся в странах ЕС и не имеют производственных мощностей на территории России.
|
| Оглавление| |