2. материалы исследования

Работа выполнялась в период с 2009 по 2012 годы в лаборатории паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института (Краснодарского НИВИ) и сельскохозяйственных предприятиях Краснодарского края.

Исследованию были подвергнуты 270 вновь синтезированных соединений и

30        препаратов     на        предмет          их        биологической          активности.   Исследования проводились совместно с ООО «Поливит» г. Уфа и НИИ ПАВ г. Волгодонск.

Производственные опыты проводили на животноводческих фермах Краснодарского края: ЗАО «Воронцовское» Ейского района и ООО «Мария» Белореченского района.

Алгоритм исследований:

Изучение биологической активности вновь синтезированных соединений. Проведение углублённые исследования биологически активных соединений к     расширенному           числу  микробиологических            штаммов,        и          дать токсикологическую оценку наиболее эффективным из них.

Установить взаимосвязи химической природы соединений и их активность в отношении исследуемых штаммов микроорганизмов.

Изучение  биологических  свойств  препарата  албиоцид  –  на  основании оценки антибактериальной и фунгицидной активности.

Исследование токсикологических свойств препарата албиоцид – путём определения острой и хронической токсичности, общего влияния на организм, кумуляции и раздражающего действий

Определение экономической эффективности применения соединений ЧАС в ветеринарии – путём проведения экономических расчётов.

Изучение биологической активности соединений in vitro проводили методом

серийных разведений по стандартной методике разведений дезинфектантов и антисептиков в питательном агаре на 2 тест-культурах бактерий ( Escherichia coli и Staphylococcus aureus) и культуре грибов (Candida albicans).

Опыт по определению антимикотической активности соединений проявляющих высокую активность в отношении тест-культур проводили в трех повторностях с использованием контрольного посева без препарата. В качестве объектов исследования использовали бактерипльные культуры: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Candida albicans, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus, Pseudomonas aeruginosa, а также грибы Candida albikans и Trichophyton mentagrophytes.

В ходе экспериментального исследования применялись клинические, фармакологические, токс и кологи че с ки е, ми кроби ологи че с кие и другие методы исследований.

Острая и хроническая токсичность препаратов определялась согласно методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических средств (Е.В. Арзамасцев, 1997).

Исследуемый препарат албиоцид относится к группе веществ четвертичных аммониевых соединений. В качестве действующих веществ    содержащий: алкилбензилдиметиламмоний хлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид, этандиал, диформиль,  щавелевый  альдегид  и  глутаровый  альдегид.  Представляет  собой

прозрачную маслянистую жидкость желтого цвета, со специфическим запахом.

Изучение антимикробной активности препарата албиоцид, проводили методом серийных разведений in vitro по стандартной методике разведений дезинфектантов и антисептиков в питательном агаре на 8 культурах бактерий.

Изучение острой токсичности препарата проводили на 30 белых крысах. Препарат  вводился  в  нативном  виде  в  желудок,  белым  крысам-самцам  живой массой тела 120-160 г, с помощью металлического зонда. Было испытано 4 дозы: 1,

2, 3 и 5 г/кг массы тела. За животными вели наблюдение в течение 2-х недель после введения, отмечая сроки гибели и клиническую картину интоксикации. Учитывали общее  состояние  животных,  сохранение  двигательных  функций,  аппетита, состояние шерстного покрова, дыхания, реакцию на внешние раздражители.

Расчёт средне-смертельных дозы (ЛД50) проводился методом пробит- анализа в модификации Прозоровского В.Б. Этот метод позволял определить угол наклона зависимости «доза -  летальный эффект» и  соответственно получить параметры ЛД84   и  ЛД16.  Приближённое значение стандартной ошибки  ЛД5 0   вычисляли по эмпирической формуле Гаддама.

Субхроническая токсичность изучалась в течение 28 дней на 30 белых крысах с массой тела 100 – 120 г, подобранных по методу пар-аналогов

Дозу препарата вводили через зонд внутрижелудочно. За животными велось ежедневное наблюдение, учитывая аппетит и общее состояние. Также проводились морфологические исследования крови перед каждым повышением дозы препарата. Гибель  животных регистрировали  на 16, 18, 19, 20, 22, 24, 26, 27 сутки от начала опыта.

Изучение аллергизирующего действия препарата албиоцид проводили путем воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста).

Для воспроизведения феномена Артюса-Сахарова было подобрано 2 группы кроликов по три кролика в каждой массой тела 1,8-2 кг. Всем кроликам в области спины выстригали небольшие участки шерсти.

В первой группе в подкожную клетчатку выстриженных участков вводили раствор албиоцид в концентрации 600 мг/л в дозе 1 мл/кг, во второй (контрольной) группе - сыворотку крови лошади в той же дозе.

Препараты вводили шестикратно с интервалом шесть дней. Наблюдение за животными вели ежедневно, в течение всего срока назначения препаратов и 6 дней после его окончания, учитывая воспалительную реакцию в местах инъекции.

Антибактериальную активность препарата албиоцид изучали in vitro по стандартной методике, в соответствии с методическим указанием о порядке первичной апробации новых дезинфицирующих средств, для ветеринарной практики

Дезинфицирующие свойства препарата албиоцид определяли на контаминированных тест-культурами (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) тест-объектах. В качестве тест-объектов использовались деревянные, кирпичные и металлические поверхности.  Контаминированный тест-объект подсушивали в течении одного часа при комнатной температуре, а затем обрабатывали средством албиоцид из опрыскивателя. Температура рабочего раствора дезинфицирующего средства и воздуха во время проведения опытов была в пределах 18-20°С, относительная влажность 65-75\%. Все опыты были поставлены в пятикратной повторности.