2.  материалы и методы исследований

Тема диссертационной работы по изучению воспроизводительной функции и репродуктивных расстройств у коров находящихся в условиях гиподинамии и методы их коррекции входили в план комплексных исследований Тюменской государственной сельскохозяйственной академии с

2000 – 2011гг. номер государственной регистрации 0120.0503976, а так же в комплексный план СО РАСХН. Работа выполнена в 17 хозяйствах различных

природно-климатических зонах Северного Зауралья в период с 2000 г по 2011 год, на 8326 животных, в том числе коровах, коровах-первотелках и растущих телках, находящихся при различных условиях содержания (гиподинамия, моцион). Базовые хозяйства были подобраны с однотипной технологией содержания и кормления животных,    с учетом их породности и продуктивности.   Все   животные   подопытных   и   контрольных   групп   в зимне-стойловый период находились на привязи в типовых коровниках. Подопытные выпускались на выгульные площадки на 2 час, контрольным в это     время     проводили     активный     моцион     по     скотопрогону.     В летне-пастбищный период подопытные животные находились на выгульных площадках, контрольные выпасались на естественных и культурных пастбищах. Кормили животных, согласно существующих норм по единым рационам, составленным из имеющихся в хозяйствах кормов с учетом их химического состава.

Репродуктивную функцию у животных изучали в условиях ЗАО, ООО, фермах и фермерских хозяйствах. (ООО Большеченчерский, ООО Шевыринский, ОПХ Тополя, СПК Ембаевский, ОАО Каскаринский, ООО Каменский, АФ Луговская, учхоз ТГСХА, ООО Перегребенский, ОАО Северный,  ОАО  Игримский  ХМАО,  МСП  Мужевское,  ООО  Горковский ЯНАО и других хозяйствах Тюменской области.) на основании документов первичного учета, актов выбраковки животных, анализ рационов кормления, биохимических и гематологических исследований крови, химических анализов кормов, используемых в хозяйствах, а также результатов диспансеризации, клинико-гинекологических, ректальных, вагинальных, морфологических,  гистологических  и  гистохимических  исследований органов репродукции.

Необходимые клинические, акушерско-гинекологические и лабораторные исследования проводились непосредственно в хозяйствах, а также на кафедре физиологии, акушерства и незаразных болезней животных Тюменской ГСХА, кафедре гистологии Тюменского медицинского академии. Отдельные исследования проведены на кафедре микробиологии, областной ветеринарной  и  агрохимической  лаборатории,  ВОНЦ  АМН  РФ, Свердловским НИИ курортологии и физических методов лечения. Коровы и коровы-первотелки исследовались как в дородовый, родовый, так и послеродовый период на 1, 7, 14, 21, 30 день.

Исследование по изучению влияния гиподинамии на становление половой функции, время наступления половой зрелости, рост, развитие, клинико-физиологические     показатели     организма,     гистологические     и гисто-химические изменения, морфофункциональное состояние репродуктивного аппарата телок проводили на базе хозяйств юга и севера Тюменской области. Для первых 5-ти серии опытов было подобрано в пяти хозяйствах по 36 тёлок с 5-ти дневного возраста, черно-пестрой породы по принципу аналогов с учетом возраста, развития, живой массы, нормального состояния здоровья, из которых были сформированы опытные и контрольные

группы. Опыт и наблюдения длились  в двух хозяйствах до 6 и в трех до 18 месяцев. Проведено пять серий опытов. Подопытные и контрольные телки содержались  в  типовых  помещениях.  Подопытные  в  зимне-стойловый  и летне-пастбищный период находились в групповых клетках, в теплые дни на выгульных площадках. Контрольные в теплые дни находились на выгульных площадках и постоянно побуждались к движению с помощью специальной установки, сконструированной М. А. Белобороденко.  В летне-пастбищный период подопытные находились на выгульных площадках, контрольные выпасались на естественных и культурных пастбищах. Кормление подопытных и контрольных животных осуществлялось по нормам используемым в хозяйствах.

Оплодотворяемость телок находящихся в условиях гиподинамии и у пользующихся  активным моционом изучали в двух сериях опытов на 50 подопытных и таком же количестве контрольных животных. Тёлок подопытной и контрольной групп осеменяли ректо-цервикальным способом в одни     и     те     же     сроки,    глубоко     замороженной     спермой    одного быка-производителя. Время осеменения у тёлок определяли по признакам течки   и   полового   возбуждения,   наличие   половой   охоты   проверяли быком-пробником.

В период опытов взят материал половых органов методом биопсии и после убоя для морфологических и    гистологических исследований. Гистологические и гистохимические исследования проведены под руководством  Заслуженного  деятеля  науки  РФ   профессора,  д.м.н  П.В. Дунаева и профессора, д.м.н. Г.С. Соловьева. Полученный материал фиксировали в жидкости Карнуа   и 10\% нейтральном формалине, заливали парафином. Гистологические срезы окрашивали по обзорным методикам (гемотоксин–Майера и эозин, «Азан» по Гейденгайну). Проведены гистохимические реакции на нейтральные и кислые мукополисахариды по Мак-Манусу и Хейду соответствующими контролями.

В  начале,  середине,  конце  опыта,  в  одно  и  то  же  время  суток  у животных   по   общепринятым   методикам  определяли   температуру  тела, частоту пульса, дыхания, сокращения рубца и их силу, содержание гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов в 1мм3. Регулярно вели наблюдения за состоянием здоровья животных, течением жвачного процесса. При исследовании крови использовали  общепринятые методики: содержание гемоглобина по Сали, форменные элементы с помощью камеры Горяева, общий белок рефрактометрическим методом, с помощью ИРФ - 22. Гормональный статус определяли радиоиммунологическим и иммунно–ферментным  анализом  с  помощью  микрострипового  фотометра, Stat facs – 303 plus и Bio rad с использованием тест систем «Алькор-Био».

Для регистрации ЭКГ у коров-матерей и у плода, подопытных и контрольных  животных  использован  электрокардиограф трехканальный ECG-300G с жидкокристаллическим датчиком. Для ECG-300G нами были разработаны    стандартные    отведения    с    использованием    специальных

электродов. Электроды устанавливали на кожу в области правой брюшной стенки. В первой половины беременности, до шести месяцев ЭКГ плода регистрировали от трех отведений: от общей для всех отведений точке, лежащей на правой брюшной стенке, под коленной складкой, и точки вентральнее маклока на 15—20 см; Течение послеродового периода контролировали визуально по клиническим признакам, по морфофункциональному состоянию половой системы, течению инволюционных процессов в половых органах.

Исследования по изучению экстрагенитальной патологии, снижающей двигательную активность животных, и влияющей на инволюцию половых органов, морфофункциональные изменения, происходящие в них, течение половых циклов и воспроизводительную способность коров проведены в 4 хозяйствах: в ООО Сидоровский, ферма Удачная, Червишевский молочный комплекс, ОАО Каскаринский, АФ Луговская Тюменской области /2000-2010 гг./. Для гистологических и гистохимических исследований репродуктивного аппарата  получен  материал  от  52  коров  на  1,  14,  30,  60  сутки  методом биопсии и после убоя.

Для коррекции репродуктивной функции, применен метод бальнеотерапии и вибромассажа. Для нагревания сапропелевой грязи использовалось специальное устройство (Патент №102379), разработана методика и устройство для интраректального виброакустического массажа с инфракрасным излучением (Патент №2294778).

За период научных изысканий сапропелевые грязи озера Тараскуль и препарат пелоидин широко исследовались Свердловским НИИ курортологии и физических методов лечения (договор о совместном сотрудничестве), Тюменской сельскохозяйственной и медицинской академией, проведены исследования бенз-(а)пирена в ВОМЦ АМН. Для трансректальных аппликаций сапропеля и пелоидина использовали специально сконструированный шприц облегченной и упрощенной конструкции (рац. предложение). Для групповой обработки животных использовали специальный аппарат для ректального введения (авторское свидетельство на изобретение  № 4661381). Во избежание повторений описания отдельных методик и клинических экспериментов, часть материала не получила своего отражения. Поэтому подробное описание их будет дано в разделах, к которым они имеют непосредственное отношение. Весь цифровой материал обработан на персональном компьютере с использованием стандартных программ.