2.  материал и методы исследований

Работа выполнялась с 1996 по 2011 годы в условиях ГНУ Самарская научно-исследовательская ветеринарная станция РАСХН, ГНУ Краснодар- ский научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН.

В проведении отдельных клинических испытаний и лабораторных ис- следований принимали участие В.А. Антипов, М.П. Семененко, К.М. Садов, В.М. Мешков, А.А. Самотаев, Ю.А. Курлыкова и др.

При изучении распространения болезней связанных с минерально-вита- минной недостаточностью была использована отчетная документация, предо- ставляемая районными управлениями сельского хозяйства, районными вете- ринарными станциями, Управлением ветеринарии Самарской области, ГУ Са- марской областной ветеринарной лабораторией с 2005 по 2011 годы.

При изучении нарушения фосфорно-кальциевого обмена проводилась клиническая оценка состояния животных и морфо-биохимические исследова- ния крови животных в хозяйствах Краснодарского края, Самарской и Орен- бургской областей.

Основные объекты исследования - пробиотическое средство - сыво- ротка молочная гидролизованная биотек; комбинированный препарат, создан- ный на основе алюмосиликатных глин - силимикс, синтетический сорбент, изготовленный на основе кварцита - приминкор.

Общетоксические свойства препаратов оценивали путем определения острой и хронической токсичности, возможных побочных свойств и отдален- ных последствий в соответствии с «Методическими указаниями по определе- нию токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и живот- новодстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ве- теринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).

При постановке опытов применялись фармакологические, клинические, биохимические, иммунологические, морфо-функциональные и другие методы исследования.

В научно-производственных опытах и производственных испытаниях использовано 222 голов крупного рогатого скота, 1424 свиней, 135819 птицы. Формирование опытных и контрольных групп, сроки и объем исследований изложены в соответствующих разделах диссертационной работы.

О фармакодинамике исследуемых препаратов судили по клиническим показателям изменениям минерального, белкового, углеводного обменов, об- щей неспецифической резистентности, интенсивности роста и продуктивно- сти животных.

Терапевтические свойства препаратов выявляли на больных животных, профилактическое - на клинически здоровых. Как здоровых, так и больных

животных, взятых в опыт, подвергали клиническим исследованиям по обще- принятым методикам. При этом у больных оценивали общее состояние, упи- танность, задержку роста и развития. Учитывалось число актов и время моче- испускания, объем разовой и суточной мочи, выделение кальция и фосфора с мочой.

На основании полученных данных высчитывали средний и среднесуточ- ный приросты массы тела животного. У сельскохозяйственной птицы учиты- вали интенсивность яйцекладки, товарные качества и массу яйца.

Ультразвуковая остеометрия проводилась с помощью медицинского прибора «Эхоостеометр» ЭОМ-01-ц, по методике А. А. Самотаева (1981). Су- точные ритмы и их ультрадианные составляющие биофизических показателей костей скелета выявляли при помощи пакета программ “Косинор-анализ” (Ерошенко В. Ш., Сорокин А. А., 1980).

Гематологические исследования, включающие в себя определение коли- чества лейкоцитов и эритроцитов, уровень гемоглобина, гематокритной ве- личины, эритроцитарные индексы определяли на ветеринарном гематологиче- ском анализитре Mindray ВС-2800 Vet, СОЭ исследовали по методу Панчен- кова. Лейкоцитарную формулу после окраски мазков по методу Папенгейма выводили при микроскопии под большим увеличением четырехпольным ме- тодом с подсчетом не менее 200 клеток.

Биохимические исследования сыворотки крови на предмет определения уровня общего белка, общего кальция, неорганического фосфора, билируби- на, щелочной фосфатазы, АсАТ, АлАТ, мочевины, глюкозы, триглицеридов проводили фотоколориметрическим метом на химическом анализаторе Mindray ВС-380 с использованием наборов химических реактивов Mindray. Белковые фракции сыворотки крови исследовали турбидиметрическим (нефе- лометрическим)  методом.  Микроэлементный  состав  крови  (железо,  цинк, медь) исследовался атомно-адсорбционным методом.

Для оценки динамики микрофлоры каловых масс поросят проводили бактериологические исследования. Идентификацию выделенных бактерий осуществляли общепринятыми методами (Зыкин Л.Ф., Хапцев З.Ю., 2006). После идентификации микроорганизмов производили пересчет их количества на 1 г исследуемого материала.

Для определения влияния фосфорно-кальциевой недостаточности на со- стояние товарных качеств свинины проводилась биохимическая и токсиче- ская оценка мяса поросят. Массовую долю белка в мясе определяли по методу Кьельдаля, жира – по методу Сокслета, влаги, триптофана метионина и цисти- на – гравиметрическим методом, фосфора – фотометрическим методом, каль- ция – титрометрическим методом, лизина – весовым методом. Токсичные эле- менты в мясе изучались следующими методами: количество свинца, кадмия – по методу инверсионной вольтамперометрии (ИВА), мышьяка – фотометри- ческим методом, ртуть – колориметрическим методом. В ходе изучения со- держания антибиотиков и пестицидов в мясе применяли метод тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Для гистоморфологической оценки влияния препаратов были отобраны кусочки тонкого кишечника, печени, мезентеральных лимфатических узлов. Материал отбирался сразу после убоя. Морфометрическое исследование  про- водили с помощью компьютерной системы анализа изображений «Видео-тест Морфо». В печени определяли диаметр печеночных долек, в тощей кишке проводили измерения высоты каемчатых эпителиоцитов, в мезентериальных лимфатических узлах измеряли диаметр центров размножения лимфоидных фолликулов.

Для оценки неспецифической резистентности в сыворотке крови опре- деляли бактерицидную активность по методу О.В. Бухарина и В.А. Созыкина (1979) с использованием тест-культуры E Colli 0111. Лизоцимную активность по О.В. Бухарину (1971) с применением суточной культуры Micrococys Lisadeсticus (штам 2665 ГКИ им. Л.А. Тарасевича). Бета-литическую актив- ность сыворотки крови по О.В. Бухарину и соавт.(1972) с использованием тест-культуры B. Subtilis (штамм 83 ГКИ им. Л.А. Тарасевича).

Суточные ритмы и их ультрадианные составляющие исследуемых пара- метров выявляли при помощи пакета программ “Косинор-анализ” (Ерошенко В. Ш., Сорокин А. А., 1980).

Связь биофизических и морфометрических показателей костей скелета, а также биохимических компонентов сыворотки крови и мочи выражали че - рез коэффициенты парной корреляции. Тенденции динамических рядов опре- деляли через линейную регрессию (Плохинский Н. А., 1980; Автандилов Г. Г.,

1990; Лакин Г.Ф., 1990).

Экономическая эффективность устанавливалась по «Методике опреде- ления экономической эффективности ветеринарных мероприятий» утвер- жденной ГУ В МСХ СССР (1982).

Подробное описание опытных и контрольных групп, а также специфики проводимых исследований в зависимости от целей и задач исследований бу- дет описано в соответствующих главах диссертационной работы.

Статистическую обработку экспериментальных данных   проводили с использованием PC Pentium с помощью приложения Microsoft office 2003 Ex- cel-7, для оценки достоверности полученных результатов использовали крите- рий Стьюдента.